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技術文章
更新時間：2024-12-05
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內容摘要
(1) 角化細胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚、口腔和耳部疾病方面具有潛力。
(2) 成年角化細胞的體外培養(yǎng)和擴增容易，適合自體和同種異體細胞治療產品。
(3) 之前限制：成年角化細胞缺乏高效的轉染方法。
(4) 本研究目標：開發(fā)符合GMP標準的、可擴展的細胞工程流程，使用MaxCyte®電穿孔技術轉染來自四個不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細胞。
實驗流程
• 從全皮樣、鼓膜、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細胞。
• 胞培養(yǎng)、擴增、冷凍保存、基因工程、驗證，最終形成細胞治療產品。
主要發(fā)現(xiàn)
• 使用MaxCyte技術，高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細胞，不損害細胞活性、形態(tài)或生長能力。
上圖：使用MaxCyte ATx電轉儀對原代包皮角化細胞進行mRNA-GFP或ATTO550標記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細胞儀分析結果，顯示了高效的轉染效率。
上圖：使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細胞的生長曲線，電轉后細胞增殖幾乎不受影響。
上圖：使用MaxCyte ATx儀器對來自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細胞、扁桃體來源的口腔角化細胞和鼓膜 (中耳) 角化細胞進行ATTO 550標記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細胞儀分析結果，顯示了高效的轉染效率。
• 單次電穿孔可實現(xiàn)高效的多重基因編輯，簡化了流程。
上圖：分別電穿孔1種、2種、6種CRISPR RNPs后96小時，使用Synthego®多向導基因敲除試劑盒進行的流式細胞儀分析。
• 提高了轉染效率和細胞活性，減少了角化細胞工程時間，提高了成功率。
• 展示了MaxCyte電穿孔過程的可擴展性，可工程化數(shù)百萬原代角化細胞，不損失效果。
MaxCyte電穿孔技術使原代角化細胞基因組工程更快，風險更低。
全文結論
(1) MaxCyte ATx®平臺提供了一種高效、符合GMP標準的多重轉染方法，用于開發(fā)和生產工程化角化細胞治療產品。
(2) 電穿孔技術保持了原代新生兒和成年角化細胞的高活性、正常形態(tài)和低氧化應激。
(3) 該技術允許多達6個CRISPR RNPs的傳遞，經過多輪轉染，效率不降低。
(4) 平臺的靈活性允許快速開發(fā)特定亞群的角化細胞和成纖維細胞的自體和同種異體細胞治療流程。
(* 本文轉載自「拓普百奧」微信公眾號，作者：宇文數(shù)學，已獲得作者授權)
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